荧光分光光度计

2021年6月4日209

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。

荧光分光光度计

通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是190~650nm,发射波长扫描范围是200~800nm。可用于液体、固体样品(如凝胶条)的光谱扫描。

荧光分光光度计的优缺点

荧光分光光度计

优点

灵敏度高,可以用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱,不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。

缺点

1、荧光的光强并不高,所以呈线性情况有时不很理想;

2、某些反应荧光持续的时间较短;

3、荧光的发散方向不集中,不像透射光那样集中,强度高;

4、受某些离子的干扰影响,荧光会湮灭,试验速度必须要快。

荧光分光光度计基本原理

荧光分光光度计

由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。

物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光。

不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱;,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。

在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行。

荧光分光光度计结构组成

荧光分光光度计的基本组成结构包括:激发光源、单色器、样品室、检测器、显示系统。

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